小鼠肝脏原位肿瘤
肝脏肿瘤原位移植使肿瘤组织增殖过程能够充分获得与原肿瘤更为相近的生长环境和生物学特点，更好模拟肿瘤细胞的免疫逃逸和侵袭转移能力；与皮下移植肿瘤相比较，摆脱了皮下结缔组织的束缚，从而更易发生肿瘤的浸润生长及转移现象。肝脏肿瘤原位移植按照接种类型分为细胞混悬液法和肿瘤组织块法。细胞混悬液接种能模拟肿瘤细胞的免疫逃逸和侵袭转移；但成瘤率较低，且形成实体瘤时间较长；细胞混悬液容易溢出，造成肿瘤腹腔内广泛种植；但基质胶混合肿瘤细胞会限制其侵袭和转移，妨碍肿瘤侵袭转移的能力。肿瘤组织块接种分为包埋法和夹心法，形成实体瘤时间较短，肿瘤生长较快，但其不能有效模拟肿瘤在肝脏中的侵袭和转移能力。细胞混悬液注射模型
1、沿腹正中线逐层剪开皮肤和腹膜至剑突上约1cm；
2、轻压胸腔暴露肝左叶，30G注射器在肝左叶边缘贴肝被膜进针，与肝脏平面呈20°进针1cm（压迫进针口）并缓慢注射25ul肿瘤细胞；
3、组织复位，缝合并消*手术伤口。
肿瘤组织块移植模型--包埋模型1、沿腹正中线逐层剪开皮肤和腹膜至剑突上约1cm；
2、轻压胸腔暴露肝左叶，25G注射器针头在肝左叶刺出盲端空洞，按压止血并清除血液残留，组织块(2*2*1mm3)放入肝脏上的盲端孔道内，并用明胶海绵压迫封止血；
3、组织复位，缝合并消*手术伤口。
肿瘤组织块移植模型--夹心模型
1、沿腹正中线逐层剪开皮肤和腹膜至剑突上约1cm；
2、将肝中叶和肝左叶向隔膜方向拨动，暴露肝右叶，先用6-0丝线穿过肿瘤组织，再从肝右叶内侧穿至外侧，然后打一个手术结，轻轻拉紧（不能拉太紧，否则容易撕裂肝脏，造成肝脏大量失血），肿瘤组织刚好可以夹在肝右叶和肝左叶之间；3、组织复位，缝合并消*手术伤口。
小鼠肿瘤肝转移
肝脏血流丰富，接受肝动脉和肝门静脉双重血供，其中肝门静脉由肠系膜上静脉和脾静脉汇合而成。肿瘤细胞由肝门静脉进入肝脏，能够留驻在肝脏组织间隙；受到毛细血管分布、血流等因素的影响，加之小鼠肝脏较薄，肿瘤细胞主要是在小鼠肝脏的表面或浅表部位形成多发与弥散的肿瘤组织；且不易形成肝脏组织局部栓塞，因此尤其适合于肿瘤细胞的生长与形成病灶。肿瘤肝脏转移模型从注射部位基本分为脾脏被膜下注射和肝门静脉注射。脾脏被膜下注射可以模拟肿瘤细胞侵袭入血管，持续、缓慢释放入血的过程并且还保留脾脏的免疫功能，但脾脏原位肿瘤影响小鼠生存期；待肿瘤细胞入血后切除或半切除脾脏均可延长小鼠生存期，但仅能模拟血行转移路径且影响脾脏的免疫功能。肝门静脉注射手术难度较大、死亡率较高，且不能复制完整的转移级联，但不影响脾脏的免疫功能。
脾脏被膜下注射—保留脾脏模型
1、脾脏体表投影区剪开0.5cm切口，拉出脾脏；
2、30G注射器从近脾下极处贴脾脏被膜下进针0.5cm并缓慢注射μl肿瘤细胞，可见注射处脾脏颜色变浅并肿胀和血管颜色变白，待脾脏颜色恢复正常拔出注射器；
3、组织复位，缝合并消*手术伤口。
脾脏被膜下注射—脾脏切除模型1、脾脏体表投影区剪开0.5cm切口，拉出脾脏；
2、30G注射器从近脾下极处贴脾背膜下进针0.5cm并缓慢注射μl肿瘤细胞，可见注射处脾脏颜色变浅并肿胀和血管颜色变白，待脾脏颜色恢复正常拔出注射器并切除脾脏；
3、组织复位，缝合并消*手术伤口。
脾脏被膜下注射—脾脏半切除模型
1、脾脏体表投影区剪开0.5cm切口，拉出脾脏；
2、脾脏中间放置两条4-0丝线并结扎，切断脾脏，脾脏上级回纳腹腔；
3、30G注射器从近脾下极处贴脾背膜下进针0.5cm并缓慢注射μl肿瘤细胞，可见注射处脾脏颜色变浅并肿胀和血管颜色变白，待脾脏颜色恢复正常拔出注射器并切除脾脏；
4、组织复位，缝合并消*手术伤口。
肝门静脉注射模型
1、沿腹正中线逐层剪开皮肤和腹膜至剑突上约1cm；
2、牵拉剑突和撑开切口，拨开肝叶可见与肝和十二指肠相连的肝门静脉；
3、牵拉十二指肠暴露肝门静脉，距肝脏约1cm的位置，30G注射器以小于5°夹角缓缓插入肝门静脉3-5mm（可见针头紧贴血管壁同时门静脉内仍有血液充盈，注射点处亦无出血），缓缓注射μl肿瘤细胞，停留3-5s拨出注射器；
4、组织复位，缝合并消*手术伤口。
DEN诱导小鼠肝脏肿瘤
二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)一种N-亚硝基的有机物质，可产生严重的肝损伤，具有致癌性，突变性和致畸性，最突出的表现是中性粒细胞浸润，广泛的小叶出血性坏死，肝细胞异常分裂，胆管增生，纤维化，和桥接坏死，并最终导致肝癌。DEN最终在小鼠体内转化为导致DNA加合物形成的烷基化代谢物，形成活性中间体，这会导致甲基化大分子的形成。其中最关键是DNA中N-7甲基鸟嘌呤和06-甲基鸟嘌呤的形成，改变了遗传信息，从而形成启动细胞，在致癌过程中起到了启动作用。这一转化过程是通过与细胞色素P酶类相关通路实现，其主要靶器官是肝脏，在小叶中心肝细胞活性最高，且这一途径与人类代谢途径相似。一次性低剂量DEN在幼鼠肝脏更易发生癌变，选择两周龄小鼠且联合CCl4肝*性药物合用诱导癌变。1、按照40mg/kg剂量腹腔注射DEN一次（2周龄）；
2、按照10ml/kg腹腔注射10%CCl4玉米油溶液，每周两次共14周。
肝脏部分切除肝脏肿瘤肝脏纤维化肝脏肿瘤肝脏缺血再灌注损伤肝脏肿瘤联系我们：上海千溯生物科技有限公司
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